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ELISA進行方法學開發(fā)時的基本原則嗎？
日期：2025-09-04 15:51
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摘要：ELISA進行方法學開發(fā)時的基本原則嗎？ 對于親和力測定方法和原理的概述，讀者可參考生物功能學篩選評價技術之親和力評價篇。 RL復合物/R即B值可用檢測的信號值代替，梯度稀釋的L和信號之間的函數(shù)關系滿足下面的公式，只有在此在特定的實驗條件下EC50值能夠等價于KD值。
你知道ELISA進行方法學開發(fā)時的基本原則嗎？
對于親和力測定方法和原理的概述，讀者可參考生物功能學篩選評價技術之親和力評價篇。
本文主要對飽和濃度法進行概括。
R代表受體或抗原，L代表配體或抗體。
采用飽和濃度法，如果要測定配體相對于受體的親和力，少量R存在的情況下，將L進行梯度稀釋，檢測R-L復合物的濃度，當R-L復合物的濃度占總R濃度的一半時，L對應的濃度值（EC50）即L相對于R的KD值。
RL復合物/R即B值可用檢測的信號值代替，梯度稀釋的L和信號之間的函數(shù)關系滿足下面的公式，只有在此在特定的實驗條件下EC50值能夠等價于KD值。
飽和濃度法測定KD值有幾個關鍵點，即相互作用的兩個分子，R要少量，L要進行連續(xù)的梯度稀釋，需要得到*大的信號響應值（所有的R的結合位點被L占據(jù)）即平臺期，那么在此條件下，占據(jù)一半R時，所需要的L濃度（EC50）為KD值。
飽和濃度法主要測定的是代表RL復合物的信號值，測定方法可以是流式細胞術、同位素標記術、熒光偏振，也可以是ELISA。
對于親和力測定方法和原理的概述，讀者可參考生物功能學篩選評價技術之親和力評價篇。
本文主要對飽和濃度法進行概括。
R代表受體或抗原，L代表配體或抗體。
采用飽和濃度法，如果要測定配體相對于受體的親和力，少量R存在的情況下，將L進行梯度稀釋，檢測R-L復合物的濃度，當R-L復合物的濃度占總R濃度的一半時，L對應的濃度值（EC50）即L相對于R的KD值。
RL復合物/R即B值可用檢測的信號值代替，梯度稀釋的L和信號之間的函數(shù)關系滿足下面的公式，只有在此在特定的實驗條件下EC50值能夠等價于KD值。
飽和濃度法測定KD值有幾個關鍵點，即相互作用的兩個分子，R要少量，L要進行連續(xù)的梯度稀釋，需要得到*大的信號響應值（所有的R的結合位點被L占據(jù)）即平臺期，那么在此條件下，占據(jù)一半R時，所需要的L濃度（EC50）為KD值。
飽和濃度法主要測定的是代表RL復合物的信號值，測定方法可以是流式細胞術、同位素標記術、熒光偏振，也可以是ELISA。